外泌体蛋白组学

外泌体内含丰富的核酸、蛋白和脂质信息，与细胞信号转导功能相关，参与疾病进展、肿瘤血管生成、免疫监视等多个环节。外泌体中的蛋白质是参与疾病发生、发展的重要组成部分。以液相色谱和串联质谱联用（LC-MS/MS）为基础的外泌体蛋白质组学研究，可以获得外泌体中的蛋白质表达谱、差异蛋白表达谱、多肽谱、差异多肽谱以及蛋白质相互作用信息，可应用于外泌体中的蛋白标志物和多肽标志物的发现、功能蛋白和多肽的挖掘、信号通路和分子机理机制等研究。

技术优势

1. 外泌体得率高、纯度高；

2. 鉴定的蛋白非囊泡来源少；

3. 鉴定的蛋白种类多；

4. 无需昂贵的稳定同位素标签标记样本，实验成本低；

5. 信息量大，样本数不受限制，可用于大规模数量样本检测；

6. 对样本的操作较少，并且不受样品条件的限制，所需样本量低；

7. 可以检测到的肽段动态范围可以达到4个数量级以上，提高了低丰度蛋白质的检测效率、非标记定量准确性。

8.因样本制宜：根据不同的样本形式选择优秀的分离方法，保证最终高质量数据的产出。例如，如果是类似血浆这种高复杂性样本，会选择不同分离方法的结合，优势互补，提高外泌体质量。

9. 起始量低：所需样本量低，支持低至几μg的样本总蛋白起始量。

10. 数据质量高：可鉴定到多数量、高质量的外泌体蛋白，经典的外泌体的标志性蛋白，如CD9、CD81、CD63等丰度排名在top 10%以内

11. 质控严格：对外泌体分离、蛋白提取、质谱前等环节进行质控

12.平台可靠：鉴定到的外泌体蛋白数量与文章报道的发现——相当或较高，有利于样本间的差异分析；大部分能注释到外泌体数据库；高度可靠的数据是高水平文章发表的基石

13. 私人订制：私人订制的项目方案，提供一站式外泌体蛋白组研究解决方案

14. 项目经验丰富：外泌体研究项目丰富，涉及数万例样本数量、涵盖10+种样本类型

应用领域

应用于外泌体中的蛋白标志物和多肽标志物的发现、功能蛋白和多肽的挖掘、信号通路和分子机理机制等研究。

仪器平台

蛋白定量采用非标记定量（Label-free）的方法，通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析，无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准，只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据，比较不同样品中相应肽段的信号强度，从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。

样品要求

1. 细胞样本：细胞样本的培养基使用量取决于细胞系以及培养状况，细胞系不同外泌体的释放量有很大差别，外泌体释放量高的细胞系几毫升培养液就足够；释放量低的则需要上百毫升。一般来说一个普通的细胞系，用超离分离外泌体，预实验（摸索条件）起始培液量最好50ml以上（直接正式实验建议100-500ml）。细胞培养过程中可以使用无外泌体血清培养基培养，也可以使用含有外泌体的血清培养细胞到一定密度（70-80%），然后吸去培养液，PBS洗数次之后换无血清培液进行培养（建议无血清培养48h后收集细胞上清）。

2. 血液样本：目前认为血清中外泌体的含量还是很高的，用促凝管或者抗凝管收集全血3000rpm 4℃ 离心10min，取上清，液氮速冻，保存于-80℃，一般需要3-5ml的血浆/血清样本。

实验周期

样本质检合格后，4-6周