蛋白MALDI-TOF-MS质谱定性分析

简介

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF-MS）是对蛋白质进行快速、准确鉴定的一项关键技术。采用MALDI-TOF-MS测得的肽质量指纹谱（PMF）在数据库中查询识别的方式鉴定蛋白质以及鉴定蛋白质分子量。可以对单一蛋白质（考/银染的2D或DIGE胶点样本）或成分比较简单的蛋白混合液进行定性分析。

基质辅助激光解析（MALDI）技术是将样品均匀包埋在基质中，基质吸收激光提供的能量而蒸发，携带部分样品分子进入气相，并将一部分能量传递给样品分子使其离子化。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比，从而检测离子MALDI-TOF在分子量可测范围内，分辨率和所测分子量的准确性等方面都优于同类技术。技术原理图如下：

MALDI-TOF MS 基本工作原理

实验流程

技术优势

1. 灵敏度高、准确度高以及分辨率高。

2. 检测周期短，通量高。

3. 适合成分简单或单一的蛋白样品，如银染或考染的蛋白胶点、标签纯化的蛋白样品

应用领域

疾病标志物筛选，作用机制研究，药物作用靶点研究，特殊功能蛋白质筛选植物抗逆研究。

仪器平台

4800 Plus MALDL-TOF/TOF质谱仪（AB SCIEX）

ultrafleXtreme MALDI TOF/TOF（布鲁克）

样品要求

1. 双向凝胶电泳点：考染、银染（质谱兼容）点清晰可见

2. 蛋白质溶液：单一蛋白质，纯度>90%，蛋白总量>5μg，浓度>0.1μg/ul

3. SDS-PAGE条带：单一蛋白质，纯度>90%，考染、银染（质谱兼容）点清晰可见