Label_free 非标定量蛋白质组学

简介

非标（label-free）蛋白质组定量技术是一种不依赖于同位素标记的蛋白质定量技术。该技术依据蛋白质丰度与质谱数据一级谱图肽段峰强度或二级谱图数目呈现一定相关性的原理，无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准，只需通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析，并对数据进行大规模分析，比较不同样品中相应肽段的信号强度，从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。label-free所需样品总量少，耗费低。

现有基于质谱的非标记定量技术主要有两种：一种是依据一级质谱相关的肽段峰强度(peak intensity)和峰面积(peak area)等信息进行蛋白定量，另一种是依据蛋白质对应肽段的二级质谱总数(spectral counts)进行定量。

label free 无标记定量法原理

实验流程

技术优势

1.无需昂贵的同位素标签标记，实验耗费低

2.对样本的操作少，接近样本原始状态

3.样本需求量少

4.不受样本条件的限制，克服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷

5.可以检测到的肽段动态范围可以达到4个数量级以上，提高低丰度蛋白的检出率和非标定量的准确性

6.可以检测不同组样本中有无差异的蛋白变化

应用领域

疾病标志物筛选，作用机制研究，药物作用靶点研究，特殊功能蛋白质筛选植物抗逆研究。
仪器平台

Thermo Scientific Q Exactive HF-X

Thermo Scientific Orbitrap Fusion Lumos

Thermo Scientific Q Exactive Plus

Thermo Scientific Orbitrap Fusion

Thermo Scientific Q Exactive

样本要求

1. 蛋白运输：24小时内可以4℃运输；

2. 蛋白长期保存：-20℃；

3. 待检测蛋白要求：蛋白量最低300μg，浓度最低要求为1μg/μl，否则同位素无法标记；

4. 蛋白提取试剂要求：使用普通的组织、细胞裂解液即可，切忌不要使用二维电泳试剂提取；

5. 直接提供组织或细胞：动物、微生物组织湿重>10mg;植物鲜嫩组织>100mg;细胞量>107个;血液体积>500μl。