iTRAQ标记定量蛋白质组学技术

简介
iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation） 技术是由美国应用生物系统公司（Applied Biosystems Incorporation，ABI) 于2004年研发的一种蛋白相对定量技术。该技术采用同位素重标签进行多肽体外标记，主要有4-plex或8-plex同位素的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，进行串联质谱分析，可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量。

iTRAQ标签包括三部分：

iTRAQ标记试剂由三部分组成：报告基团（reporter group）、质量平衡基团(balance group)和肽反应基团（amine-specific reactive group）。按照平衡基团的区别，可以分成两组试剂：

第一组：iTRAQ 4-plex有4种分子量（114~117），平衡基团分子量4种（31~28）

第二组：iTRAQ 8-plex有8种分子量（113~121，无120），平衡基团分子量8种（192~184）

平衡基团与不同的报告基团搭配，能保证被标记的不同来源的同一肽段在一级质谱中具有相同的质荷比。肽反应基团能与肽段N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接，从而使肽段连上标记。

 iTRAQ 标签结构和定量原理

实验流程：

技术优势：
灵敏度高：分级分离，降低样品复杂度，可检测低丰度蛋白；
分离能力强：可分离出酸/碱性蛋白，小于10KD或大于200KD的蛋白、难溶性蛋白等；
适用范围广：不受样品来源制约，可以对任何类型的蛋白质进行鉴定，包括膜蛋白、核蛋白和胞外蛋白等；
高通量：可实现同时对8个样本进行差异蛋白质组分析，特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样本；
结果可靠：基于高度敏感性和精确性的串联质谱方法，定性与定量同步进行，同时给出每一个组分的相对表达水平、分子量和丰富的结构信息；
自动化程度高：液相色谱与串联质谱连用自动化操作，分析速度快，分离效果好。

应用领域：
医学研究：研究特定疾病发生的遗传变异，如单基因遗传病、罕见疾病基因检测等。

医学诊断：阐释疾病的发生发展机制，发现与疾病相关的生物标志物， 以应用于疾病诊断、治疗、预后及用药研究。
动植物研究：动植物生长发育、抗病、抗逆机制研究以及育种研究。同时可实时更新和补充关联信息的完整性。
农业研究：用于品系鉴定、优势性状筛选、群体遗传学分析、亲缘关系分析等。

样品要求：